ВИЧ – бич нашего поколения. Какие существуют методы для диагностики ВИЧ, углубленная информация о ИФА-тесте на ВИЧ. Как сдавать, как трактовать результаты анализа.

Вирус иммунодефицита человека – одна из самых страшных инфекций для нашего поколения.

ВИЧ деструктивно влияет на нашу иммунную систему, и если вовремя не остановить прогресс заболевания, он может трансформироваться в синдром приобретенного иммунодефицита . ВИЧ распространяется через непосредственный контакт партнеров при сексуальном акте через мужские и женские половые органы. Еще одной причиной заражения может стать попадание вируса через кровь. Это происходит вследствие использования нестерильных инструментов, переливанием зараженной крови и даже через поколения: ребенку от инфицированной матери при кормление грудью.

До сих пор ученые по всему миру ломают голову над созданием лекарства нового поколения, способного излечить от СПИДа, однако, несмотря на большие темпы научного прогресса, вирус иммунодефицита человека продолжает распространяться по планете.

ИФА – метод диагностики ВИЧ

Учеными поколения 20-го века разработано несколько методов диагностики ВИЧ, важнейшим из которых считают иммуноферментный анализ. ИФА на ВИЧ стали проводить относительно недавно – в начале девяностых годов. С течением времени метод оттачивался, приобретал новые детали. Теперь достоверность метода ИФА одна из самых высоких – около 98%. Соответственно, такой метод проводится все чаще.

ИФА – первый анализ, с которым сталкивается пациент при обследовании на ВИЧ. Метод ИФА определяет наличие в крови антител. Если тест находит присутствие антител в крови, значит, и вирус присутствует. Однако, информацию по этому тесту необходимо подкреплять и другими анализами, такими как иммунный блоттинг (ИБ) и метод последнего поколения – полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Антитела – специальные белковые соединения, которые продуцируют плазматические клетки после как реакцию на попадание в организм инфекции (антитела начинают образовываться через 1-2 месяца с момента заражения).

Причины возникновения ВИЧ

Врач выпишет вам направление на анализ, если вы контактировали с человеком, зараженным ВИЧ либо существует опасность инфицирования. К группе опасности заражения ВИЧ относят поколения людей:

• проходящих в течение месяца курс инъекционного лечения;
• имеющих сексуальные отношения без специальных средств предохранения;
• переносчиков инфекций, передающихся во время сексуального контакта;
• пациентам после прохождения процедуры переливания крови либо укола обнаружения причины свертывания крови в восьмидесятые годы.

Если у вас есть сомнения относительно вашего ВИЧ-статуса и опасения, связанные с возможностью заражения, рекомендуется незамедлительно обратиться за помощью в любое медицинское учреждение нашей страны для проведения комплексного обследования на ВИЧ. Результат на анализы получают в течение месяца. Людям в группе риска по ВИЧ рекомендуется проходить обследование через каждые 4 месяца.

Как сдать анализ

Какой-то особенной подготовки к сдаче анализа крови на ВИЧ не требуется, однако лучше придерживаться простейших правил:

• лучше не кушать с вечера, а сдавать анализ натощак утром;
• не советуют загружать организм физической работой;
• употреблять здоровую пищу, воздержаться на некоторое время от сигарет и алкоголя;
• для исключения ложных показателей теста не стоит сдавать анализ после лечения серьезных заболеваний.

А зачем вообще мне проверяться на ВИЧ?

Тестирование на ВИЧ — это единственный способ определить есть ли у Вас ВИЧ или нет. Когда Вы знаете свой ВИЧ-статус, Вы уверены в своём здоровье и знаете, что не заразите своего любимого. Чем раньше выявлен ВИЧ, тем раньше можно начать лечение и сохранить своё здоровье.

Обязательно сдайте анализ на ВИЧ, если:

• у Вас было соитие без барьерной защиты,
• Вы пользовались использованным иглой, шприцем,
• у Вас был рискованный контакт и это Вас очень беспокоит. Лучше один раз провериться, чем долго мучаться от страха неизвестности.

Многие люди боятся сдать тест на ВИЧ, а зря. Лучше сдать и знать о своём ВИЧ-статусе, чем напрасно переживать (если ВИЧ минус) или заражать других (ВИЧ плюс).

Почему не надо бояться сдать анализ на ВИЧ?

• Это очень легко и быстро. Провериться на ВИЧ легко и быстро можно с помощью экспресс-теста слюны или крови.
• Лучше знать. Это нормально бояться сдавать на ВИЧ. Но нужно пересилить себя и поставить точку в этом, это намного лучше, чтобы или забыть об этом (при условии исключения рискованного поведения) или начать немедленно лечение при положительном результате.
• Поможет прожить долгую и счастливую жизнь. Если у тебя обнаружат ВИЧ на ранних стадиях, то жизнь не кончилась, а наоборот только начинается + можно рано начать терапию и избежать СПИДа. При правильном лечении и уходе, человек инфицированный ВИЧ может прожить жизнь качественно, как средний ВИЧ-негативный.
• Лечение бесплатно. Если у тебя выявят ВИЧ, то ты будешь получать бесплатно дорогостоящие лекарства, которые снизят и укрепят иммунную систему.
• Здоровая половая жизнь. Если ты будешь знать свой статус и ВИЧ результат твоего партнёра, то ты будешь спокоен за ваши половые отношения соития. Вы ничем друг друга не заразите.

Да не оскудеет рука дающего

Проект «СПИД.ВИЧ.ЗППП.» — некоммерческий, созданный добровольцами-экспертами в области ВИЧ/СПИДа за счет своих собственных средств, чтобы донести правду людям и быть чистыми перед своей профессиональной совестью. Будем благодарны за любую помощь проекту. Да воздастся Вам в тысячи крат: ПОЖЕРТВОВАТЬ .

Краткая история тестирования на ВИЧ.СПИД

1981 г. — первый случай СПИДа.

1984 г. — выявление ВИЧ.

1985 г. — сертифицирован первый тест на ВИЧ.

1987 г. — создана первая тест-система Вестерн Блот.

1992 г. — внедрен первый быстрый тест.

1994 г. — создан первый тест определения ВИЧ по слюне.

1996 г. — первый домашний тест и тест определяющий ВИЧ по моче.

2002 г. — первый экспресс тест на ВИЧ из пальца.

2004 г. — первый экспресс тест определения ВИЧ в слюне.

Когда надо обязательно провериться на ВИЧ?

Обследоваться на ВИЧ можно в любое время, особенно, когда был контакт с ВИЧ-положительным человеком или неизвестно болеет она/она ВИЧ-инфекцией или нет.

Если даже Вы думаете, что у Вас не было риска заразится ВИЧ — обследуйтесь хотя бы 1 раз в год. Это нисколько не помешает и Вы сами будете спокойны и уверены.

Как правильно называется анализ крови на ВИЧ?

ИФА, Иммуноблот, ПЦР.

У меня был риск заражения ВИЧ, когда сдавать анализы?

Если у Вас было незащищенное соитие или Вы пользовались использованным шприцем, иглой (даже если она «стерилизованная»), то не медлите и как можно быстрее обратитесь к врачу для определения риска заражения ВИЧ и назначения анализов и .

Прошло 2 недели после контакта с ВИЧ-инфицированным

Прошёл месяц после рискованного контакта человеком у которого может быть ВИЧ

Подойдет метод ИФА с помощью тест-систем 4-го поколения.

Если Вы уверены, что заразились (что, обычно, в 99% неправда), помни, что человек инфицированный ВИЧ больше всего заразен и представляет опасность для своих контактных именно в ранние стадии ВИЧ-инфекции . Поэтому соблюдайте меры безопасности: или воздерживайтесь от соитий, психоактивных веществ или .

Через сколько времени можно сдать последний анализ на ВИЧ, что бы быть уверенным на 100%, что не заразился ВИЧ?

Сдать последний раз на ВИЧ, забыть и впредь думать головой:

• ИФА 4 поколения - 6 недель от предполагаемого риска;
• ПЦР РНК ВИЧ - 4 недели от предполагаемого риска;
• ИФА 3 поколения - 12 недель от предполагаемого риска.

Какого поколения был мой тест на ВИЧ?

Для Российской Федерации - обычно четвертого (для Беларуси, Украины — 3-го). В названии теста 4 поколения обычно присутствует что-либо из слов: «Combo», «At/Ag», «АТ/АГ», «антиген-антитело» или «p24». В любом случае, чтобы не гадать - узнайте точно у медработника . Вам обязаны предоставить данную информацию.

Я думаю, что у меня НЕ было риска заразиться ВИЧ, нужно ли мне тестироваться на ВИЧ?

По крайней мере 2 раза в год нужно обследоваться на ВИЧ и другие венерические заболевания, чтобы вовремя заметить болезнь и её вылечить и для уверенности — так спокойнее.

Я беременная, нужно ли мне обследоваться на ВИЧ?

Обязательно! Скорее всего тебе предложат сдать на ВИЧ уже в женской консультации или роддоме. Не отказывайся! Это важно для здоровья твоего ребенка . Если врач будет знать, что Вы ВИЧ-положительная, то он сможет помочь защитить ребёнка от заражения ВИЧ .

А можно ли узнать есть ли ВИЧ-инфекция без анализов?

Возможно с большой долей вероятности поставить диагноз «ВИЧ-инфекция», но ТОЛЬКО в стадии СПИДа. До СПИДа также можно ЗАПОДОЗРИТЬ ВИЧ-инфекцию. До стадии вторичных проявлений, СПИДа, особенно в латентной стадии ВИЧ-инфицированный будет выглядеть как обычный человек !

Как работают диагностические тест-системы для определения ВИЧ, СПИДа?

3-е поколение тестов (ИФА антитело)

Когда человек заражается ВИЧ, то в его организме вырабатываются антитела (защитники, специальные белки, которые атакуют вирус). Антительный ИФА тест определяет эти антитела в крови, слюне и моче. Если она находит антитела, это означает, что человек заражен ВИЧ. Этот тест точен только через 3 месяца после заражения, т.к. организму требуется время, чтобы выработать необходимый уровень антител, который сможет увидеть тест.

Что такое антитела?

Антитела - это белки иммуноглобулины, которые связываются с бактериями и вирусами и нейтрализуют их. Каждое антитело специфично, т.е. оно связывает и нейтрализует только один вид бактерий или вирусов и не действует на другие. Антитела у человека вырабатываются клетками крови - В-лейкоцитами.

Антитело - это белок (иммуноглобулин), который циркулирует в плазме крови и связывается с антигеном, вызвавшим его образование.

Что такое антигены?

Антиген - любое вещество (чаще белок, но может быть и углевод), вызывающее выработку антител лимфоцитами. Белки и другие вещества на поверхности любых «не своих» клеток рассматриваются как антигены и вызывают сходный специфический ответ, т.е. продукцию антител.

В случае с ВИЧ антигенами являются белки вируса .

4-е поколение тестов (Комбинированный антиген-антитело ИФА)

Тесты 4-го поколения также обнаруживают антитела (белки иммунной системы человека, которые вырабатываются в ответ на инфекцию), но и также антиген p24, поэтому определяют наличие ВИЧ раньше, чем тесты ИФА 3 поколения.

Антитела вырабатываются организмом в ответ на ВИЧ-инфекцию, но на их выработку нужно некоторое время («период окна»).

p24 антигены — это частицы самого вируса ВИЧ, их очень много находится в крови в первые несколько недель после инфицирования ВИЧ, именно, в эти первые несколько недель ВИЧ-инфицированный максимально заразен.

Антиген ВИЧ p24, который обычно и определяют тест-системы, это белок вирусного капсида (core компонент), суть - непосредственно кусочек вируса, понятно, что он начинает определяться в крови ранее, чем антитела. Т.е. «период окна» для теста 4 поколения совсем небольшой.

Когда же начинают обнаруживаться в большом количестве и антитела против ВИЧ, спустя некоторое время, то антиген p24 часто уже не выявляется, т.к. образуется комплекс между антигеном и антителами в крови, белок становится связанным с другим белком.

Тесты 4-го поколения могут выявить вирус ВИЧ через 11 дней — 1 месяц после заражения. Доказательства:

• «The detection of acute HIV infection» J Infect Dis. 2010 Oct 15;202 Suppl 2:S270-7. Cohen MS, Gay CL, Busch MP, Hecht FM. — 17 дней ;
• «How can we better identify early HIV infections?» Rosenberg NE, Pilcher CD, Busch MP, Cohen MS. — 5-10 дней после возможности детекции методом ПЦР (7-10 дней);
• «Diagnosing acute HIV infection» Expert Rev Anti Infect Ther. 2012 Jan;10(1):31-41. Yerly S, Hirschel B. — 20-25 дней для систем 3 поколения, и на 4 дня менее для систем 4 поколения (медианное значение, диапазон 2-14 дней ).

Лабораторные ИФА-системы 4 поколения с очень высокой вероятностью «не пропустят» ВИЧ-инфекцию уже через месяц поле инфицирования.

Быстрые (экспресс) тесты

С помощью быстрых тестов результат на ВИЧ можно получить, где угодно на месте, даже в домашних условиях, НО … вероятность ложноположительного результата при использовании быстрых тестов намного выше, п.э. всё равно потом нужно переделывать на нормальных.

Наборы быстрых тестов для определения заражения ВИЧ.

Самотестирование

Для того, чтобы определить наличие ВИЧ у себя в домашних условиях, нужно купить в аптеке быстрый тест на ВИЧ. Обычно, в аптеке продаются тесты для определения ВИЧ по слюне, очень удобные. Точно следуй инструкции по применению теста. В случае положительного результата срочно обратись в .

Как сдать анализ на ВИЧ?

Существует несколько учреждений, где можно пройти тестирование на ВИЧ. Можно сделать анализ в поликлинике по месту жительства. Для этого необходимо обратиться к участковому терапевту. Анализ проводится методом ИФА (иммуноферментный анализ) . Результат готов обычно в течение 7 — 14 дней .

Пройти тестирование на ВИЧ можно в Центре по профилактике СПИД , если таковой имеется в Вашем городе. Здесь Вы можете сдать кровь анонимно, не предоставляя свои персональные данные. Результат будет готов в период от 2 до 7 дней (возможно, уже на следующий день).

В данных учреждениях анализ на ВИЧ проводится бесплатно . В частных медицинских центрах можно пройти тестирование на ВИЧ на платной основе. Здесь преимуществом является то, что анализ готов уже в течение нескольких часов-первых суток .

Возможно проведение исследования даже в домашних условиях с использованием экспресс–тестов , которые сейчас продаются в аптеках на территории Российской Федерации. С точки зрения здравого смысла это не лучший вариант, так как получив отрицательный результат, вы не можете быть 100% уверенными в том, что у Вас нет ВИЧ, а если он будет положительным, необходимо будет перепроверить его другим методом (ИФА), так как есть вероятность получения ложноположительного результата.

Новый алгоритм определения ВИЧ.

Что такое ложноположительный и ложноотрицательный результат при исследовании на ВИЧ?

Ложноположительный результат

Ложноположительный результат (когда инфекции в организме нет, а результат теста положительный), можно получить по ряду причин. Некоторые, так называемые, аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит, системная красная волчанка , склеродермия и др.), аллергические заболевания в активной фазе, беременность, гормональные расстройства, острые инфекционные, онкологические заболевания, резко повышенные показатели компонентов крови (холестерин), недавно проведенные прививки могут приводить к появлению антигенов в крови человека, которые вследствие высокой чувствительности может «уловить» тест – система. Кроме того, к получению ложного результата может банально привести ошибки медицинского персонала,«человеческий фактор» :

• неправильно промаркировали пробирки,
• ошиблись при внесении образца во время проведения анализа,
• ошибки при документировании
• перепутали пробирки,
• не тому выставили результат,
• загрязнили пробу и т.д.

Ложноотрицательный результат

Ложноотрицательный результат (ВИЧ – инфекция есть, но результат теста отрицательный). Одна из частых причин получения такого результата – период « ». Другая причина – несостоятельность иммунной системы человека либо в конечной стадии заболевания – стадии СПИД, либо при приеме иммуносупрессивной терапии – после трансплантации органов, а также при иммунодефицитах. В этом случае иммунная система человека просто не в состоянии вырабатывать антитела к ВИЧ, которые определяются при проведении тестирования. Не исключены и факторы технического характера – погрешности при хранении и транспортировке сданной на анализ крови, при проведении анализа.

Что такое антитела к ВИЧ?

Что такое период серологического окна (сероконверсии)?

Это период времени после заражения человека ВИЧ, когда вирус в крови присутствует и нередко в очень больших количествах, а антитела к вирусу иммунная система еще не успела наработать. У таких людей результат исследования на ВИЧ методом ИФА будет отрицательным, так как этот метод определяет антитела к ВИЧ в крови. Обычно антитела у большинства инфицированных людей появляются в крови в течение трех месяцев после заражения, у малого процента людей – через 6 месяцев, у единиц – в срок до года.

Что сдают для анализа на ВИЧ?

Для тестирования на ВИЧ методом ИФА берется кровь из вены. При использовании экспресс – тестов возможно использование крови из пальца, слюны и мочи.

Как подготовиться к сдаче анализа на ВИЧ?

Сдавать анализ на ВИЧ нужно натощак, так как некоторые вещества, поступающие в кровь после приема пищи, могут повлиять на точность тест – системы. Так, если в крови резко повышаются холестерин и липиды после употребления жирной пищи, это может привести к искажению результатов.

Какими методами лучше делать анализ крови на ВИЧ?

При первичном обращении пациента кровь исследуется методом ИФА. Его преимуществами являются очень высокие специфичность (то есть выявляются антитела только к вирусу иммунодефицита человека и к никаким другим) и чувствительность (определяются даже самые малые концентрации антител к ВИЧ).

Существуют так называемые экспресс- тесты для экспресс анализа на ВИЧ. Они основаны на методе иммунохроматографии. Для диагностики заражения ВИЧ этим методом можно использовать цельную кровь из пальца, слюну. Но достоверность этих быстрых тестов ниже, чем ИФА.

Частота ложноположительных результатов при их использовании достигает 1% . Согласно санитарным правилам «О профилактике ВИЧ — инфекции», исследование на антитела к ВИЧ с применением быстрых тестов должно сопровождаться обязательным исследованием той же порции крови с помощью стандартных лабораторных технологий, разрешенных к применению в Российской Федерации.

Диагностировать заражение ВИЧ можно и методом , но не рекомендуется, т.к. очень дорогой, более длительный и технически более сложный, чем ИФА, что предполагает большие риски ошибок. Тестирование пациента при первом его обращении проводится всегда методом ИФА, так как он более прост в исполнении, не требует больших затрат времени и особых условий (ПЦР – лаборатории), но достаточно достоверен. Однако использование ПЦР позволяет диагностировать инфицирование в период серологического окна, начиная с 10 – 14 дня заражения . Следует учитывать и то, что чувствительность ПЦР достигает 98%, что ниже, чем у ИФА (более 99,5%). К тому же, анализ методом ПЦР платный и стоит недешево. Оптимальный вариант диагностики – метод ИФА с использованием тест – систем 4 поколения с определением и антител к ВИЧ, и р24 антигена. Это позволяет получить достоверный результат в период сероконверсии.

Почему задерживают результат анализа на ВИЧ?

Выдача результата на ВИЧ задерживается в том случае, если был получен положительный результат исследования на ВИЧ. Дело в том, что в диагностике ВИЧ -инфекции существует определенный алгоритм. Если получен положительный результат, та же порция крови должна быть исследована в другой тест-системе другого производителя или формата теста. При получении повторного положительного результата проба исследуется в тест-системе опять же другого производителя или другого формата. При получении третьего «плюс»-результата, кровь передается для исследования в реакции иммунного блоттинга.

Что представляет собой тест иммунного блоттинга?

Это разновидность ИФА, где определяются не антитела ко всем компонентам ВИЧ, а антитела к конкретным белкам вируса. Суть в том, что вирус имеет в своем составе различные белки: оболочки, сердцевины и ферментные белки. На стрипе (полоске, похожей на тест на беременность) эти белки нанесены в виде полос. При взаимодействии с сывороткой инфицированного человека в результате ряда реакций эти полосы становятся видимыми. Если сыворотка не содержит антител к ВИЧ, то полоска остается чистой. Этот метод является референтным, те есть по его результатам в совокупности с клиническими проявлениями и эпидемиологическими данными (при наличии рисков заражения, незащищенные контакты, использование инъекционных наркотиков и др.) выставляется диагноз «ВИЧ – инфекция».

Почему после получения отрицательного результата на ВИЧ рекомендуют сдать кровь еще раз через 2- 3 месяца?

Чтобы исключить сдачу крови в период серологического окна. Нужно отметить, что в настоящее время для ИФА – диагностики используют тест системы 4 поколения, в которых определяются не только антитела к ВИЧ, но и антиген p 24, который появляется в крови с конца второй недели заболевания и является показателем размножения ВИЧ в крови. Это снижает вероятность получения ложноотрицательного результата.

График динамики появления маркеров ВИЧ.

Когда появляются маркеры ВИЧ, «период окна».

Как интерпретировать результат анализа на ВИЧ?

Отрицательный результат на ВИЧ

Если Вы сдавали кровь на ВИЧ методом ИФА, то результат «отрицательный» означает то, что у Вас не обнаружено антител к ВИЧ . Это свидетельствует либо о том, что Вы не инфицированы вирусом иммунодефицита человека , либо о том, что антитела в крови после встречи с ним не успели выработаться иммунной системой .

Что предпринять в этом случае, чтобы устранить все сомнения?

Пересдать кровь этим же методом через два – три месяца, что практически исключит заражение в случае получения отрицательного результата. Если же Вы человек тревожный, то третий повтор анализа еще через полгода означает, что у Вас нет ВИЧ в крови (при отсутствии, конечно же, рисков заражения в течение этого интервала времени).

Положительный результат на ВИЧ

При получении положительного результата либо формулировки «антитела к ВИЧ обнаружены» , необходимо не останавливаться на данном этапе и обязательно продолжить обследование по нескольким причинам.

1. Во–первых, есть вероятность получения ложноположительного результата. Возможно, у Вас имеются хронические заболевания, беременность или другие факторы, которые могут повлиять на процесс тестирования крови. Чтобы избежать ошибок в диагностике, имеется алгоритм исследования первично-положительной крови, состоящий из нескольких этапов.
2. Во-вторых, если Вы действительно инфицированы ВИЧ, то качество Вашей жизни напрямую зависит от своевременного начала противовирусной терапии. Уже доказано, что при начале лечения в стадии острой ВИЧ – инфекции, продолжительность жизни ВИЧ – инфицированного пациента приближается к средней ее продолжительности у здорового человека.

Когда много лет назад мне поставили диагноз «ВИЧ-инфекция», то я думал, что теперь он будет подчинять всю мою жизнь. Но сегодня для меня ВИЧ — это крошечный вирус, который Я контролирую, а не он меня.

— Алексей.

Я сдавал быстрый тест в мобильном кабинете анонимного тестирования и никак не ожидал, что тест покажет мне положительный результат. Я выл как раненая белуга: «Кто будет растить моих детей??!!! Сколько мне осталось жить??» Но мне повезло, мне попался очень классный врач, и он мне сказал, что он знает кучу людей, которые живут с ВИЧ по 20 лет и нормально себя чувствуют и даже рожают по несколько детей, и это помогло мне пережить этот стресс. Я буквально жил его словами первые несколько самых тяжелых месяцев. И сейчас со мной всё в порядке, у меня прекрасные дети, семья, работа!

— Саша.

Помни! Сейчас ВИЧ-инфекция лечится, жизнь не закончилась, а начинается новая, переосмысленная жизнь и ВИЧ — это не приговор, при условии правильного, регулярного лечения с помощью антиретровирусной терапии. Обязательно регулярно посещай врача СПИД-центра, дай ему возможность выполнить свою работу и помочь тебе. Не подавайся , это бедные, несчастные люди, которые оказались в глубокой яме и других туда тащут.

Также, заодно можно провериться и передающиеся половым путем: сифилис, трихомониаз, гарднереллез.

Где же Вам могут помочь в данной ситуации?

Если Вы сдавали кровь в поликлинике, Вас направят к врачу – инфекционисту. Если же анализ был сделан в частном центре анонимно или дома при помощи экспресс – тестов, Вы можете обратиться либо в Центр по профилактике СПИД, либо к инфекционисту в поликлинике по месту жительства. И помните, Ваша жизнь – в Ваших руках!

У кого обязательно берут кровь на ВИЧ?

• Больных наркоманией (в направлении на ВИЧ будет указан код 102),
• Тем, кому перелили кровь, компоненты крови (плазму, эритроцитарную массу) (код 110),
• Доноров крови, плазмы, (код 108),
• Больных , (код 104),
• Гомосексуалов, (код 103),
• Детей рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, (код 124),
• Заключенных, (код 112),
• Контактных по гетеросексуальному половому(код 121), наркотическому пути передачи с ВИЧ+(код 123),
• Пилотов, бортпроводников и авиадиспетчеров, (код 118),
• Железнодорожников (машинисты, стрелочники, тот, кто пути и поезда обслуживает), (код 118),
• Призывников, военных, (код 111),
• Полицию, (код 118),
• Медицинских работников, врачей, (код 115)
• Иностранцев, (код 200),
• Беременные, (код 109),
• По клиническим показаниям с симптомами, болезнями похожими на СПИД, (код 113),
• Больные гепатитами В,С, (код 118),
• Умершие с подозрением на наличие ВИЧ (наркоманы, бомжи и т.п.), (код 118),
• коренные малые народы Севера (ненцы, ханты, манси, коми, зыряне и др.), (код 118-х),.

Благодаря развитию современной медицины, врачу при постановке диагноза больше не нужно ориентироваться на косвенные проявления заболеваний или проводить многоступенчатые лабораторные исследования. Достаточно провести один анализ, который подтвердит или опровергнет предполагаемый первоначальный диагноз.

Таким методом является иммуноферментный анализ (ИФА) — это исследование позволяет обнаружить специфические антитела и антигенны свойственные при разнообразных патологиях, что во многом ускоряет установку диагноза.

ИФА анализ — это такоелабораторное исследование (метод), которое помогает определить присутствие или отсутствие определённых антител в организме для борьбы с вирусом и их количество.

Основой исследования является естественная реакция антиген (вредоносный организму объект) – антитело (белок уничтожающий вредоносные объекты), позволяющая выявить присутствие разнообразных вирусов, бактерий.

ИФА представляет собой естественный иммунный ответ организма – взаимодействие антитела с соответствующим антигеном. Так во время ИФА в пробирку с материалом добавляются поочередно антигены или антитела, после чего происходит выявление концентрации получившихся комплексов антиген-антитело.

Если совпадения образовались, то возникают иммунные комплексы, далее происходит ферментная реакция красящего вещества с объединённой молекулой. Именно благодаря изменению цвета в ходе ферментативной индикации происходит идентификация заболевания после исследования уровня определяемого соединения.

Виды иммуноглобулинов

Иммуноглобулины человека дифференцируются на несколько классов, отличающихся друг от друга свойствами, структурой и антигенными особенностями тяжелых цепей (Н-цепи). У всех млекопитающих, в том числе и человека, выделяют пять Н-цепей, которые и определяют принадлежность иммуноглобулинов к соответствующему классу: G, М, A, D, Е.

Каждый класс отличается друг от друга биологическими свойствами, и способностями связывать антигены, и скоростью и прочностью связи с молекулой.

Функции каждых иммуноглобулинов (lg) различны:

	Кол-во в организме	Функции	Период полураспада (дней)	Значение
G	70%	Формируют пассивный иммунитет у новорожденного; необходимы для иммунного ответа улучшают фагоцитоз,	21-24	обеспечивают длительный гуморальный иммунитет при инфекционных заболеваниях
М	5-10%	нужны для активации фагоцитоза, способны связать 5 молекул антигена,	5	Обеспечивает первичную иммунную реакцию
А	10-15	Нейтрализуют токсины и вирусы нужны для формирования раннего иммунитета Возникновение иммуноглобулинов происходит по своеобразной «цепочке» — lgM lgG, именно так реагирует организм на появление в организме антигена. Во время лабораторной диагностики проводится оценка концентрации трех основных иммуноглобулинов – G, M, A. Показания к сдаче анализа на иммуноглобулины ИФА-анализ с каждым годом становится все более популярным. Такое исследование ускоряет постановку диагноза, а это очень важно для терапии таких патологий как: вирусный гепатит; ВИЧ-инфекция; цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барр, вирус герпеса, краснуха, туберкулез, сальмонеллёз, дизентерия, клещевой энцефалит, бактерии хеликобактер, боррелиоз, столбняк, сифилис, дифтерия, лептоспироз, хламидиоза, уреаплазмоз, микоплазмоз, коклюш. плоскими червями аскаридами гистолическими амебами, печеночными тремадами, лямблиями, токсоплазмами, трихинеллами, двуусткой, цестодозами. ИФА является своеобразным маркером аутоиммунных патологий и злокачественных новообразований. Подготовка к сдаче анализа При подготовке к исследованию следует придерживаться таких правил: Так же врачи рекомендуют придерживаться специальной диеты – исключить жирную и жареную пищу, а если исследование проводится на гепатиты, то необходимо не употреблять любые оранжевые овощи и особенно цитрусовые. Сдавать кровь следует с утра на голодный желудок. Ложноположительным анализ бывает из-за невыполненных рекомендаций, особенно употребления жирной пищи, что приводит к слишком большой концентрации триглицеридов в плазме, из-за чего проводимость ИФА снижается. Порядок взятия пробы В качестве исследуемого материала может использоваться цельная кровь, сыворотка или плазма венозной крови. Забор материала, обычно проводится из локтевой вены, для этого применяется одноразовая игла и вакуумная пробирка, необходимо 5-10 мл крови. Для точности результата важно придерживаться правильной техники взятия пробы – прокол самого сосуда и окружающих тканей должен быть произведен одной манипуляцией, поэтому используется короткая игла с большим диаметром, благодаря чему не травмируется противоположная стенка вены и не повреждаются эритроциты. Так же для сохранения целостности эритроцитов, нужно чтобы кровь стекала по стенкам пробирки. Во время хранения материала следует избегать возможной его ионизации, кроме того материал не должен контактировать с остатками дезинфицирующих средств, поэтому используется только одноразовая пластиковая пробирка, с маркировкой ФИО пациента, датой и временем сдачи материала. Если необходимо непродолжительное хранение исследуемого материала, то используется холодильная камера с температурой 2-4 о С, если необходимо более продолжительное хранение, то материал замораживается при температуре -20 о С. Как делают анализ После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены. Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так: Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag). Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab). Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе. В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора. Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА. При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей. Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном. После этого следует ферментативная реакции – добавление в лунки раствора с ферментом, после чего происходит окрашивание полученных связей. При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию. Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете. Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами. Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате. Когда будет готов анализ Проведение исследования не занимает много времени, от забора крови до получения результата проходит от 1 до 10 дней, в зависимости от диагностических мероприятий. Результаты теста и их расшифровка На полученном пациентом бланке-результате диагностики указывается отрицательный либо положительный результат на определенные классы иммуноглобулинов, так же указывается количественный показатель различных классов антител. Возможны различные интерпретации результатов: IgM (+) (IgA, IgG не определялись) – процесс выздоровления; IgM (-) ;IgG (+), IgA (+) – хроническая инфекционная патология; IgM, IgG, IgA (все с – значением) – отсутствие защитных механизмов к инфекциям; IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) – острый процесс; IgM (-), IgA(-),IgG(+) – постинфекционный иммунитет; IgM, IgG, IgA (+) – хроническая патология в стадии обострения. Так, например, если были обнаружены IgG и IgM, то возможно у пациента одно из таких заболеваний: вирусный гепатит; цитомегаловирус; герпес; ветряная оспа; хламидиозом; стафилококковая или стрептококковая инфекция. Иммуноферментный анализ часто назначается при гормональных исследованиях, нормы показаны в таблице: Название гормона Пол Норма 1 тиреоглобулин м/ж До 70 МЕ/мл 2 тироксин м/ж 64-146 нмоль/л 3 трийодтиронин м/ж 1,8-2,8 нмоль/л 4 Свободный тироксин м/ж 11-25 пмоль/л 5 Свободный трийодритонин м/ж 4,49-9,3 пмоль/л 6 Тестостерон, дегидротестостерон Ж 0,5-10 мЕд/л ИФА анализ — это такое диагностическое исследование, которое позволяет оценить вероятность образования онкологических патологий. Однако интерпретация результатов проводится только лечащим врачом. Значение результатов теста ИФА подходит для выявления разнообразных форм половых инфекций, в том числе сифилиса, часто используется и для скрининга беременных. Благодаря этому исследованию можно узнать, как давно произошло заражение и стадия заболевания на момент исследования: иммуноглобулины М говорят о длительности заболевания; IgA — пациент заразился более 30 дней назад; IgG обнаруживается на «пике» заболеваний, или же в тот момент, когда терапия окончилось недавно. В процессе исследования лунки на планшете с отрицательным показателем остаются бесцветные, а положительные окрашиваются в ярко-желтый цвет. Если цвет положительных лунок не совпадает с цветом контроля, то результат считается сомнительным и необходимо повторное исследование. Иммуноферментный анализ — это первая ступень в диагностике ВИЧ. Проводить анализ нельзя сразу же после предполагаемого заражения необходимо дождаться окончания инкубационного периода (от 14 дней до 6 месяцев). В ходе анализа определяются антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, происходит поиск АТ класса G, который обычно появляется на более поздних сроках и АТ класса А и М, они могут быть определены на ранних стадиях (во время инкубационного периода). если первый тест дал положительный результат, то кровь вновь перепроверяется другим лаборантом; повторный положительный результат предполагает пересдачу материала, при повторении результата, пациенту назначается иммуноблотинг. Окончательный вывод о наличии ВИЧ-инфекции выдается только после результата иммуноблотинга. ИФА также применяется в качестве диагностического исследования туберкулеза, но если у пациента даже и были выявлены антитела к данной патологии, то это не всегда подтверждает наличие у него туберкулеза, поэтому ИФА часто применяется качестве уточняющей методики, либо же для диагностики скрытой внелегочной формы. IgG- хроническая стадия инвазии
IgA – заражение произошло более 30 дней назад
	IgG – инвазия находится в острой фазе
IgG – подтверждает диагноз и показывает эффективность терапии

Плюсы и минусы анализа

ИФА имеет множество достоинств, что и объясняет его популярность среди врачей и пациентов, это:

• высокая точность результата,
• доступная цена,
• быстрый результат,
• выявление стадии заболевания,
• контроль заболевания в динамике.

Однако наравне с достоинствами существует и недостаток – в редких случаях анализ бывает ложноположительным или ложноотрицательным.

Почему результат может быть недостоверным

Ошибки в результате могут возникать из-за технических нарушений, так же недостоверным анализ бывает у людей с некоторыми хроническими заболеваниями (ревматоидный фактор) для которых характерной является выработка специфических антител.

Так же на конечный результат оказывает влияние употребление пациентов медикаментов и нарушение метаболизма. По данным причинам положительный результат на ВИЧ и онкопатологии требует повторную сдачу проб.

Стоимость исследования

Цена ИФА варьируется в зависимости от направления диагностики (руб.):

• гепатит 250 -900;
• вирусы – 250 -1000;
• ВИЧ – 250-350;
• глистные инвазии – 280 — 900;
• сифилис -150-250;
• грибковые инфекции 400-500.

Оформление статьи: Лозинский Олег

Видео о ИФА анализе

Как выполняется анализ ИФА:

Анализ крови на ВИЧ или тест на ВИЧ включает в себя несколько методов лабораторной диагностики, позволяющих выяснить присутствие вируса иммунодефицита (ВИЧ), обнаружить антитела к его белкам (иммуноглобулины) или антигены (белки вируса) в крови больного, слюне или моче. Вирусу иммунодефицита человека присуща уникальная антигенная изменчивость, что связано с большой скоростью транскрипции (размножения), в связи с чем затрудняется как диагностика ВИЧ-инфекции, так и ее профилактика.

В основе диагностики ВИЧ-инфекции, как и любого другого инфекционного заболевания лежит:

• эпидемиологический анамнез,
• характерные жалобы больного,
• клиническая картина заболевания,
• данные лабораторных методов исследования.

Как только диагноз ВИЧ-инфекции установлен, с целью уточнения характера течения основного заболевания и вторичных заболеваний проводится дальнейшее обследование больного и назначается соответствующее лечение.

Тяжесть заболевания оценивается по уровню концентрации вирусов в крови, количеству CD4-лимфоцитов и определению антигена р24.

Основные виды диагностики ВИЧ-инфекции

Вирусологическая диагностика основана на выявлении ВИЧ в тканях и биологических жидкостях больного.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) применяется с целью выявления вируса и оценки вирусной нагрузки, что позволяет судить об эффективности специфического лечения и прогнозировать течение инфекционного заболевания.

Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции предполагает выявление антигенов вируса и антител в сыворотке крови. Обнаружение антител к с помощью ИФА (иммуноферментного анализа) является основным методом лабораторной диагностики. Все положительные результаты подтверждаются методом иммуноблоттинга. основан на выявлении антител в крови и биологических жидкостях исследуемого. Используются в случаях, когда необходимо быстро получить результат.

Уровень иммуносупрессии определяется методикой подсчета СD4 и СD8-лимфоцитов, с последующим определением соотношения CD4: CD8.

Каждый из лабораторных методов диагностики ВИЧ-инфекции характеризуется определенной чувствительностью (% верно определенных среди заведомо (+) образцов) и специфичностью (% правильно определенных тестов среди заведомо отрицательных образцов). Результаты теста на ВИЧ интерпретируются как отрицательные, положительные или сомнительные.

Рис. 1. На фото слева ВИЧ заражают иммунную клетку (обозначено желтым). На фото справа лимфоцит, поражённый ВИЧ. Вытянутые структуры на поверхности клетки вызваны гиперпродукцией белка.

Рис. 2. На фото зафиксирован процесс выхода (отпочкования) вирионов из инфицированной клетки.

Анализ крови на ВИЧ. Что надо знать

Анализ крови на ВИЧ может сделать любой житель нашей страны по своему желанию анонимно и бесплатно. Но есть категории лиц, которые обследуется на ВИЧ в обязательном порядке. К ним относятся:

• все доноры крови и ее компонентов, а также тканей и других биологических жидкостей;
• лица, которым была проведена трансфузия или осуществлена трансплантация (проводится в течение первых 3-х месяцев после проведения процедуры);
• беременные;
• лица, пострадавшие в результате аварии;
• лица, имеющие клинические показания — лихорадку, диарею, постоянный кашель и увеличение более 2-х групп лимфатических узлов, длящиеся более 1-го месяца, необъяснимую потерю веса, СПИД-ассоциированные и оппортунистические инфекционные заболевания, соматическая и онкопатология;
• иностранные граждане;
• лица из группы риска (наркоманы и страдающие венерическими заболеваниями).

Тест на ВИЧ необходимо проводить всем, кто был подвергнут риску заражения.

Рис. 3. Анализ крови на ВИЧ в нашей стране можно сдать анонимно и бесплатно.

Где сдать кровь на ВИЧ

Анализ на ВИЧ можно сдать бесплатно в учреждениях здравоохранения, работающих на бюджетной основе при наличии паспорта и медицинской страховки. Врачи при этом обязаны хранить врачебную тайну. Бесплатно и анонимно можно сдать анализ в Центрах профилактики и борьбы со СПИДом и там же получить врачебную консультацию до и после обследования. На платной основе проводится тестирование на ВИЧ в коммерческих лечебных учреждениях. Тест на ВИЧ может пройти любой человек, временно проживающий на данной территории.

В лаборатории будет сделан анализ крови на ВИЧ иммуноферментным методом (ИФА).

Анализ на ВИЧ анонимно

В государственных учреждениях здравоохранения (поликлиниках и больницах) анонимно сдать анализ крови на ВИЧ нельзя. Сведения о результатах исследования будут известны узкому кругу медиков, которые обязаны хранить врачебную тайну.

Кабинеты анонимного тестирования существуют на базах Центров СПИДа, где каждому исследованию присваивается номер.

Рис. 4. Пробирки с кровью отправляются на серологическое исследование.

Анализ на ВИЧ принудительно

Существует четыре группы населения, тестирование на ВИЧ которых является обязательным, но не насильственным:

1. Доноры крови и другого биологического материала.
2. При устройстве на работу в учреждения, где работник может иметь контакт с заведомо инфицированным материалом и больными.
3. Иностранные граждане при получении виз для проживания (более 3-х месяцев) на территории РФ.
4. При наличии клинических показаний лицам, находящихся в местах лишения свободы.

Принудительное тестирование населения на ВИЧ является бесперспективным и противоречит соблюдению прав человека. Принудительное тестирование населения в РФ является незаконным.

Рис. 5. Тестирование на ВИЧ осужденных проводится по клиническим показаниям.

Сколько стоит анализ на ВИЧ

В государственных учреждениях обследование на ВИЧ бесплатное, в частных клиниках — платное:

• Стоимость ИФА составляет от 400 до 800 руб. Ответ будет готов по истечении одних суток. Существует срочная диагностика, когда ответ можно получить в течение 2-х часов.
• Стоимость анализа на ВИЧ методом иммуноблота составляет от 3 до 5 тыс. рублей. Результат будет готов через 4 — 7 дней.
• Стоимость теста на ВИЧ методом ПЦР составляет 10 — 12 тыс. руб. Результат будет готов через 10 — 14 дней.

Сколько делается анализ на ВИЧ

В государственных учреждениях срок получения результатов анализа на ВИЧ составляет:

• При применении ИФА 3-го поколения результаты дают самый достоверный результат через 12 недель от момента предполагаемого инфицирования.
• При применении ИФА 4-го поколения — 6 недель.
• При применении ПЦР — 4 недели.

Как сдавать анализ на ВИЧ

• Сдавать анализ на ВИЧ необходимо не ранее, чем через 3 — 4 недели от предполагаемого заражения.
• Тестирование проводится не ранее, чем через 8 часов после приема пищи.

Из жидкости можно употреблять только обычную воду.

• Для анализа осуществляется забор 3 — 5 мл крови, взятой из локтевой вены, для чего используется обычный шприц или игла с помпой.
• До транспортировки в лабораторию сыворотка крови может храниться в холодильнике до 7-и дней. Без холодильника не более 30 минут после забора.
• Транспортировка пробирок с сывороткой крови осуществляется в специальных термоконтейнерах при температуре +4 — +8 о С.

Рис. 6. Для анализа на ВИЧ необходимо провести забор 3 — 5 мл крови, взятой из локтевой вены — для чего используется обычный шприц (фото слева) или игла с помпой (фото справа).

При заборе крови из вены вирусом иммунодефицита человека заразиться невозможно.

Ложноположительный анализ на ВИЧ и другие виды результатов исследования

Результаты анализа на ВИЧ могут трактоваться как положительные, отрицательные и сомнительные.

Сомнительный результат теста на ВИЧ получается при присутствии в сыворотке крови антител, которые перекрестно реагируют с белками вируса иммунодефицита человека. Анализ в данном случае сдается повторно, а при его проведении будут применяться белее специфичные тест-системы. Если сомнительный результат сохраняется, то тестирование необходимо проводить каждые 1 — 3 месяца в течение полугода.

Положительный результат теста на ВИЧ (серопозитивный) говорит о наличии в крови исследуемого антител к вирусу. В данном случае иммуноферментный анализ (ИФА) повторяется и при получении повторного положительного результата подтверждается тестом иммуноблотинга с тем же образцом крови.

Отрицательный результат теста на ВИЧ (серонегативный) говорит об отсутствии ВИЧ-инфекции, либо инфицирование произошло совсем недавно и в крови обследуемого еще не выработались антитела (период «окна»). В таком случае обследование следует повторить через 3 и 6 месяцев.

Ложноположительный результат теста на ВИЧ регистрируется тогда, когда его причиной явился не вирус иммунодефицита человека, а беременность, аутоиммунное заболевание, аллергия, любое другое инфекционное заболевание, недавно сделанная прививка, онкопатология, трансплантация органа и даже обычная еда (семечки, острая, жирная и кислая пища, употребленная накануне, и даже минеральная сильногазированная вода). Большое количество ложноположительных результатов получается при проведении тестирование в домашних условиях.

Ложноотрицательный результат теста на ВИЧ говорит о том, что вирус в крови больного присутствует, но антитела еще не выработались. При проведении анализа ПЦР ложноотрицательный результат может быть получен у ВИЧ-инфицированных больных в период проведения специфического лечения, когда концентрация вирусов в крови настолько мала, что приводит к несрабатыванию тест-системы. В большинстве случаев ложноотрицательный результат получается при технической ошибке или браке в тест-системе, что встречается крайне редко ввиду проведения жесткого контроля качества на всех уровнях.

Анализ на ВИЧ необходимо отложить минимум на две недели после перенесенного инфекционного заболевания или вакцинации.

Рис. 7. Проведение серологического исследования крови.

Тест-системы, определяющие наличие антител к ВИЧ

При помощи тестирования на антитела к вирусу иммунодефицита человека оценивается ответ организма на инфицирование. С этой целью применяется иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA), позволяющий обнаружить антитела к белкам вируса и подтверждающий анализ иммуноблотинг (вестерн-блот), при помощи которого определяется реакция антител на белки вируса.

Антитела к ВИЧ

Вирусы иммунодефицита человека обладают антигенными свойствами и при попадании в организм человека вызывают синтез антител — специфических иммуноглобулинов. С помощью современных тест-систем в сыворотке крови и других биологических жидкостях больного ВИЧ можно определить класс иммуноглобулинов (антител). Раньше всех (через неделю после инфицирования) появляются иммуноглобулины класса IgМ. Их рост отмечается в течение месяца и далее они сохраняются еще около 30 дней. Иммуноглобулины класса IgG циркулируют в крови несколько лет. Их выявление является показателем наличия ВИЧ-инфекции.

Антитела к ВИЧ появляются через 2 — 4 нед. после инфицирования и далее они определяются в крови на протяжении всего заболевания.

Период «окна» при ВИЧ

Антитела в организме инфицированного человека вырабатываются не сразу. На первых порах ВИЧ-инфекция ничем себя не проявляет. Антитела появляются в крови в среднем через 2 — 3 месяца от момента заражения (от 2-х недель до 6-и месяцев). Этот период получил названия «окна», когда анализы на антитела еще отрицательные, но вирусы интенсивно размножаются, а сам больной становится опасным в плане заражения контактных лиц. Выявить инфицированного можно через более короткий (1 — 2 недели) период после заражения, для чего применяется полимеразная цепная реакция (ПЦР). Однако из-за дороговизны данный вид исследования для скрининга не используется.

Иммуноферментный анализ при диагностике ВИЧ

У 90 — 95% инфицированных лиц антитела в сыворотке крови появляются через 3-и месяца после заражения, У небольшой части больных (5 — 9 %) антитела появляются в период от 3 до 9 месяцев и у 0,5 — 1% — в более поздние сроки. В терминальной стадии СПИДа количество антител снижается значительно, а в некоторых случая исчезают вовсе.

С 1985 года данная методика используется на территории РФ с целью массовых исследований. Он прост в исполнении, показывает довольно точные результаты, является дешевым по сравнению с другими методиками. В связи с возможностью получения ложноположительных результатов все положительные результаты исследуются дважды, после чего сыворотка крови больного исследуется подтверждающим тестом — иммунного блота. При этом используется тот же образец крови. При наличии 2-х положительных результатов с применением ИФА и иммуноблота в одной пробе ставиться диагноз ВИЧ-инфекции.

В РФ используются обычно ИФА 4-го поколения. Исследование проводится с целью получения суммарного спектра антител против белков (антигенов) ВИЧ — р24 и gр160.

Тест видит как антитела, которые вырабатываются организмом больного, так и антигены (белки вируса) р24. «Период окна» для тестов 4-го поколения более короткий. Уже через месяц можно получать достоверные результаты. Однако более надежными, как считают специалисты здравоохранения РФ, являются сроки 6, 8 или 12 недель.

Рис. 8. На фото иммуноферментные анализаторы.

Рис. 9. На фото иммуноферментный автоматический анализатор.

Для первичного обследования групп лиц с целью выявления ВИЧ-инфекции применяется только методика ИФА.

Метод иммуноблотинга

Метод иммуноблотинга является более точным, чем ИФА, по мнению большинства специалистов — эталонным. С его помощью в сыворотке крови обнаруживают антитела к белкам ВИЧ. Методика применяется с целью подтверждения результатов, полученных при проведении ИФА. Обладает высокой специфичностью. Ложноположительные результаты встречаются редко. Достоверность полученных результатов достигает 99%. Иммуноблотинг является дорогостоящей методикой и требует высокой специализации специалиста, проводящего исследование. Возможно получение сомнительных результатов.

Метод основан на разделении антигенов (белков) ВИЧ с применением электрофореза по молекулярной массе. Первыми при инфицировании выявляются антитела против капсидных белков «Gag» (р24 и р17) и прекурсор р55. Вслед за ними появляются антитела против суперкапсидных белков «Env » (гликопротеидов gр 160, gр120, gр41 и белков р88) и неструктурных белков «Pol» (р31, р51 и р66). В ряде случаев могут определяться антитела против генов «vpu », «vpr », «vif », «tat », «nef », «rev », «tat ».

Сыворотка крови больных ВИЧ-1 и ВИЧ-2 содержит антитела ко всем белкам вирусов, но для подтверждения диагноза определяются у ВИЧ-1 только антитела к белкам р24, gр41, gр120 и gр160, у ВИЧ-2 — антитела к белкам gр105, gр140 и gр36.

При наличии 2-х положительных результатов с применением ИФА и иммуноблота в одной пробе ставиться диагноз ВИЧ-инфекции.

Рис. 10. Аппарат для проведения исследования методом иммуноблота.

Рис. 11. Диагноз ВИЧ-инфекции ставиться при наличии 2-х положительных результатов с применением ИФА и иммуноблота в одной пробе.

Тест-системы для подсчета СД4-лимфоцитов

Одним из иммунологических тестов, применяемых при ВИЧ-инфекции, является методика подсчета СD4 и СД8-лимфоцитов в крови.

СD4-лимфоциты (Т-хелперы) поражаются вирусами иммунодефицита. Постепенное истощение их популяции приводит к снижению иммунитета и организм больного перестает противостоять инфекции. Подсчет CD4-лимфоцитов осуществляется методом проточной цитометрии с помощью автоматических анализаторов или вручную при оптической или флюоресцентной микроскопии. По количеству СD4-лимфоцитов определяется время начала специфического лечения (антиретровирусной терапии) и профилактики оппортунистических инфекций, оценивается эффективность лечения.

• При количестве CD4-лимфоцитов в сыворотке крови от 500 и ниже в 1 мл говорит о развитии иммунодефицита.
• При снижении количества CD4-лимфоцитов до 200 в 1 мл (норма от 600 до 1900 клеток в 1 мл) развивается синдром приобретенного иммунодефицита — СПИД.
• При снижении уровня CD4-лимфоцитов до 50 и ниже в 1 мкл СПИД переходит в терминальную стадию.

Удельный вес CD4-лимфоцитов среди всех лимфоцитов в норме составляет около 40%. Снижение показателя до 20% говорит о развитии СПИДа.

CD 8-лимфоциты (Т-киллеры, на англ. killer - убийца) уничтожают вирусы ВИЧ путем цитолиза. Их пролиферация (увеличение количества) зависит от активности Т-хелперов. При ВИЧ-инфекции количество CD4 и CD8-лимфоцитов уменьшается, но более всего падает уровень CD4-лимфоцитов. Соотношение CD4/ CD8 в норме составляет 1,5 — 2,5. При снижении количества CD4- лимфоцитов отмечается снижение индекса.

Его величина менее 1 говорит о развившемся иммунодефиците, при показателе соотношения 0,6 — 0,8 развивается СПИД.

При получении положительных результатов тестирования человек должен стать на учет в государственное учреждение Центр профилактики и борьбы со СПИД, где будет установлен мониторинг за его состоянием и назначено адекватное специфическое лечение.

Рис. 12. На фото проточные автоматические анализаторы с помощью которых осуществляется подсчет CD4-лимфоцитов в крови исследуемого.

Тест на ВИЧ с применением ПЦР

Все большее распространение в последние годы получает молекулярно-генетический метод диагностики ВИЧ-инфекции — полимеразная цепная реакция (ПЦР). С ее помощью определяется генетический материал возбудителя — РНК уже через 1 — 2 недели после предполагаемого заражения, а высокая чувствительность теста позволяет выявлять РНК вирусов даже если их в исследуемом материале находятся единицы. Данная методика является дорогостоящей и поэтому в настоящее время для скрининга не используется. К тому же значимой проблемой исследования является возможность получения ложноположительных результатов.

Суть методики ПЦР при ВИЧ

Суть данной методики заключается в получении множества копий РНК вируса (нуклеиновой кислоты), в последующем выявляемых как по характерному строению, так и с помощью меченых ферментов или изотопов.

Возможности ПЦР при ВИЧ-инфекции

С помощью ПЦР можно разрешить сомнительные результаты, полученные при применении методики иммуноблотинга, диагностировать ВИЧ-инфекцию на ранних стадиях (уже через 1 — 2 недели после предполагаемого заражения), контролировать эффективность проводимой антиретровирусной терапии, определять стадию заболевания.

Рис. 13. На фото слева нормальный Т-лимфоцит, справа — Т-лимфоцит, инфицируемый ВИЧ. Видны множественные пузыри, между которыми появились новообразованные вирусы (мелкие округлой формы образования). С помощью ПЦР ВИЧ-инфицированность выявляется уже через 1 — 2 недели после предполагаемого заражения.

Преимущества методики ПЦР при ВИЧ

• С помощью ПЦР возможно выявить сам вирус и его количество.
• Возможность использования у детей младше полутора лет.
• Проводить оценку эффективности лечения.
• Определить тяжесть и прогноз заболевания.

Недостатки методики ПЦР при ВИЧ

• Большая стоимость исследования.
• Наличие специализированных лабораторий.
• Длительность получения результатов (до 4-х недель).

Кому проводится ПЦР

1. Получение результата на 7 — 10 день лицам в случае предполагаемого инфицирования, когда желателен результат, полученный в короткие сроки.
2. Для определения срока начала и оценки эффективности проводимого лечения.
3. ПЦР проводится инфицированным беременным за 4 недели до родов с целью решения вопроса о применения кесарево сечения.
4. Новорожденным от инфицированных матерей. Дважды полученный положительный результат свидетельствует о заражении ребенка.

В обычных условиях для скрининга и диагностики ВИЧ-инфекции ПЦР не используется

РНК ПЦР и ДНК ПЦР. В чем разница

• РНК ПЦР доказывает факт наличия вируса иммунодефицита в крови и объем выявленной РНК. Данное исследование применяется у диагностированных лиц с целью оценки эффективности проводимой терапии.
• С помощью ДНК ПЦР определяется наличие вируса в мононуклеарных клетках у детей, когда антитела к вирусу иммунодефицита человека у матери мешает использовать методику ИФА.

Вирусная нагрузка определяется путем подсчета количества РНК-копий в 1 мл плазмы крови, что позволяет определить стадию заболевания, провести анализ проводимого специфического лечения, определить тяжесть и прогноз заболевания. Чем выше вирусная нагрузка, тем меньше в плазме крови регистрируется CD4-лимфоцитов.

Интерпретация результатов:

• РНК либо не выявлена, либо число копий РНК менее 20 в 1 мл. плазмы.
• РНК выявлена на пределе чувствительности — менее 20 копий/мл.
• РНК от 20 до 10 6 копий в 1 мл плазмы крови говорит о достоверности результата.
• РНК-копий более 10 6 мл — верхний предел линейного диапазона.

Увеличение вирусной нагрузки у больного с ВИЧ-инфекцией в три и более раза является клинически значимым результатом.

Контроль над вирусной нагрузкой проводится каждые 3 месяца у больных, лечение которым еще не проводится. В случае начала проведения антиретровирусной терапии контроль осуществляется через 2 — 8 недель.

Рис. 14. ПЦР в последние годы пользуется все большей популярностью.

Рис. 15. Амплификаторы для проведения ПЦР.

Тест на ВИЧ необходимо проводить на ранних сроках инфицирования и периодически при заболевании, что обеспечит своевременное назначение антиретровирусной терапии предупреждение и развития грозных инфекционных и онкологических процессов.

Культивирование вируса

Обнаружить вирусы, его РНК, ДНК, антигены и антитела можно не только в сыворотке крови, но и сперме, слюне, содержимом влагалища и др. Культивируют ВИЧ в культуре клеток лимфоцитов. Методика является высокочувствительной и специфичной (до 100%), однако дороговизна исследования не позволяет его использовать в повседневной лабораторной работе.

Общий анализ крови на ВИЧ

В результате поражения вирусами иммунодефицита человека кроветворных органов отмечается угнетение кроветворения, что проявляется снижением числа лимфоцитов (лимфопения), нейтрофилов (нейтропения), тромбоцитов (тромбопения) и анемия. К тому же на разрушение клеточных популяций оказывают влияние аутоиммунные процессы, развивающиеся у ВИЧ-инфицированных больных. В сыворотке крови больных доминирут иммуноглобулины IgG.

Рис. 16. Забор крови из вены и пальца для анализов.

Сегодня сдать анализ на ВИЧ можно любому человеку анонимно и бесплатно за считанные минуты, а современное оборудование и обученный персонал позволяют получить максимально точные результаты.

Описание

Подготовка

Показания

Интерпретация результатов

Описание

Метод определения Иммуноферментный анализ (ИФА).

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Комбинированное выявление антител к ВИЧ типов 1 и 2 и антигена р24 ВИЧ, качественный тест.

Внимание. При положительных и сомнительных реакциях, срок выдачи результата может быть увеличен до 10-ти рабочих дней. ВИЧ (вирус иммунодефицита человека), вызывающий СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита) - принадлежит к семейству ретровирусов. Передается от человека к человеку при использовании загрязненных игл и шприцев для внутривенного введения наркотиков или терапевтических процедур, при сексуальных контактах, как гетеро, так и гомосексуальных. Передача вируса может произойти при переливании инфицированной крови и ее продуктов, донорстве органов или семенной жидкости, у медицинских работников - при ранении инфицированными иглами или инструментами. Заражение ВИЧ возможно путем его передачи от инфицированной матери ребенку (вертикальный путь), хотя современные методы профилактики с применением антиретровирусной терапии, при выполнении всех рекомендаций, позволяют снизить такой риск до минимума.

Процесс взаимодействия вируса с клеткой включает ряд стадий: связывание вируса с клеткой, освобождение его от оболочки, проникновение в цитоплазму, синтез ДНК по вирусной РНК, встраивание вирусной ДНК в геном клетки-хозяина. После этого начинается латентная стадия инфекции. В таком состоянии провирусная ДНК может существовать некоторое время, не проявляя активности и не влияя на жизнедеятельность клетки-хозяина. Пока нет экспрессии вирусных белков, нет и иммунного ответа на вирус. Антитела к ВИЧ, характеризующие иммунный ответ организма, появляются после активации вирусной ДНК и начала активного размножения вируса. Длительность латентного периода зависит от ряда факторов, включая и индивидуальные генетические особенности организма.

Антитела к ВИЧ могут появиться, начиная со второй недели после инфицирования; их содержание увеличивается в течение 2-4-х недель и сохраняется на протяжении многих лет. У 90-95% инфицированных они появляются в первые три месяца после заражения, у 5-9% - в период от трех до шести месяцев, у 0,5-1% – в более поздние сроки.

В первые недели инфекции, еще до появления антител к вирусу (т.е. до сероконверсии), в образцах сыворотки или плазмы можно выявить присутствие антигенов ВИЧ, в том числе его капсидного белка р24. Позже, после сероконверсии, он обычно становится недетектируемым.

Комбинированные тест-системы 4-го поколения, к которым относится тест HIV Ag/Ab Combo (Architect, Abbott), выявляют как антитела к ВИЧ 1 и 2 типов, так и антиген р24 ВИЧ, что позволяет проводить раннее обнаружение инфекции. К особым характеристикам применяемого в лаборатории ИНВИТРО скринингового теста для выявления ВИЧ-инфекции стоит отнести высокую специфичность исследования (> 99,5%); 100% чувствительность анализа к антителам, характерным для периода сероконверсии, и чувствительность теста к антигену р24 порядка 18 пг/мл.

Порядок проведения лабораторного обследования на ВИЧ строго регламентирован приказами МЗ РФ и включает в себя этап скринингового (отборочного) исследования наличия антител к ВИЧ иммуноферментными (ИФА) методами, разрешенными к использованию, и этап верификационного (подтверждающего) более развернутого исследования в лаборатории городского центра СПИД. Следует отметить, что даже лучшие скрининговые ИФА-системы не гарантируют 100% специфичности, то есть существует некоторая вероятность получения неспецифических, ложноположительных результатов, связанных с особенностями сыворотки крови пациента. Поэтому положительный результат скринингового ИФА обследования может не подтвердиться в подтверждающих тестах, после чего пациенту выдадут отрицательный или неопределенный результат. При неопределенном результате подтверждающего исследования тестирование следует повторить в динамике через 2-3 недели.

Лабораторная диагностика ВИЧ инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, имеет свои особенности. В их крови до 18-ти месяцев с момента рождения могут циркулировать материнские антитела к ВИЧ (класса IgG). Отсутствие антител к ВИЧ у новорожденных не означает, что вирус не проник через плацентарный барьер. Дети ВИЧ-инфицированных матерей подлежат лабораторно-диагностическому обследованию в течение 36-ти месяцев после рождения.

Подготовка

Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи. С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться . Целесообразно проводить исследование на обнаружение антигена и антител к ВИЧ не раньше, чем через две недели после возможного инфицирования, с повторением его через три и шесть недель в случае отрицательного результата. Оформление заявок для проведения исследований в ООО «ИНВИТРО» осуществляется по паспорту или документу, его заменяющему (миграционная карта, временная регистрация по месту жительства, удостоверение военнослужащего, справка из паспортного стола при утере паспорта, регистрационная карта учёта из гостиницы). Предъявленный документ в обязательном порядке должен содержать информацию о временной или постоянной регистрации на территории РФ и фотографию. При отсутствии паспорта (документа его заменяющего) пациент вправе оформить анонимную заявку для сдачи биоматериала. При анонимном обследовании, заявке и полученному от клиента образцу биоматериала присваивается номер, известный только пациенту, и медперсоналу, оформлявшему заказ. ! Результаты исследований, выполненных анонимно, не могут быть представлены для госпитализации, профессиональных осмотров и не подлежат регистрации в ОРУИБ.

Показания к назначению

• Увеличение лимфатических узлов более двух областей.
• Лейкопения с лимфопенией.
• Ночная потливость.
• Резкое похудание неясной причины.
• Диарея более трех недель неясной причины.
• Лихорадка неясной причины.
• Планирование беременности.
• Предоперационная подготовка, госпитализация.
• Выявление следующих инфекций или их сочетаний: туберкулез, манифестный токсоплазмоз, часто рецидивирующая герпесвирусная инфекция, кандидоз внутренних органов, повторные невралгии герпес-zoster, вызванная микоплазмами, пневмоцистой или легионеллами пневмония.
• Саркома Капоши в молодом возрасте.
• Случайные половые контакты.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения в Независимой лаборатории ИНВИТРО: тест качественный. Форма представления результатов: при отсутствии антител к ВИЧ 1 и 2 и антигена р24 выдается ответ «отрицательно». В случае обнаружения антител к ВИЧ или антигена в скрининговом иммуноферментном тесте пробу сыворотки отправляют для исследования подтверждающим методом иммуноблота в городской центр СПИД, который верифицирует положительные и неопределенные результаты.

Положительный результат:

1. ВИЧ - инфекция;
2. ложноположительный результат, требующий повторных или дополнительных исследований*);
3. исследование неинформативно у детей до 18 мес, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.

*Специфичность скрининговой тест-системы Антитела к ВИЧ 1 и 2 и антиген ВИЧ 1 и 2 (HIV Ag/Ab Combo, Abbott), по оценкам, представленным производителем реагентов, составляет около 99,6% как в общей популяции, так и в группе пациентов с потенциальными интерференциями (инфекции HBV,HCV, Rubella, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E.coli, Chl.trach. и др., аутоиммунные патологии (включая ревматоидный артрит, присутствие антинуклеарных антител), беременность, повышенный уровень IgG, IgM, моноклональные гаммапатии, гемодиализ, множественные гемотрансфузии).